本试剂盒仅限于科学研究,严禁用于医学诊断检测。该试剂盒采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被adropin(AD)抗体的微孔中,依次添加样本、标准品及HRP标记的检测抗体,通过温育后彻底洗涤。使用底物TMB进行显色,TMB在过氧化物酶的催化作用下转化为蓝色,随即在酸性环境下转化为最终的黄色。颜色深浅与样品中的adropin(AD)浓度成正相关。最终在450nm波长处使用酶标仪测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
**试剂盒组成**
- 微孔酶标板:96孔配置(12孔×8条), 48孔配置(12孔×4条)
- 标准品:0mL(03mL*6管)
- 样本稀释液:6mL(3mL)
- 检测抗体-HRP:10mL(5mL)
- 20×洗涤缓冲液:25mL(15mL)
- 底物A:6mL(3mL)
- 底物B:6mL(3mL)
- 终止液:6mL(3mL)
- 封板膜:2张(2张)
- 说明书:1份(1份)
- 自封袋:1个(1个)
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。 保存条件为 2-8℃,有效期为6个月。
**样品收集、处理及保存方法**
- 血清:使用不含热原和内毒素的试管,避免细胞刺激,收集后3000转离心10分钟,迅速小心分离血清和红细胞。
- 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟取上清。
- 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
- 组织匀浆:将组织与生理盐水混合捣碎,3000转离心10分钟取上清。
- 保存:样本收集后不及时检测的,请按一次用量分装,置于-20℃冷冻,避免反复冻融,并确保在室温下完全解冻后使用。
**自备物品**
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头:05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
**操作步骤及注意事项**
- 试剂盒从冷藏环境取出后需在室温下平衡15-30分钟后使用,若酶标板未用完,应放入密封袋中储存。
- 洗涤液可能析出晶体,稀释时可加热帮助溶解,洗涤不会影响结果。
- 加样时请使用加样器,并定期校对,控制每次加样在5分钟内,如样本数量较多,建议用排枪加样。
- 每次测定应同时做标准曲线,推荐做好复孔。如样本中待测物质含量过高,请先按比例稀释后再测定,并在计算时乘以总稀释倍数(×n×5)。
- 封板膜仅限一次性使用以防交叉污染。
- 严格按说明书操作,试验结果依据酶标仪读数为准。
- 底物需避光保存。
- 所有样本、洗涤液和废弃物应按感染性物质处理。
- 不同批号的试剂成分不得混用。
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